ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് അനാലിസിസിന്റെ തത്വങ്ങളും രീതികളും

ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ വേർതിരിക്കൽ സംവിധാനം രണ്ട് ഘട്ടങ്ങളിലുള്ള മിശ്രിതത്തിലെ ഘടകങ്ങളുടെ ബന്ധത്തിലെ വ്യത്യാസത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്.

വ്യത്യസ്ത നിശ്ചല ഘട്ടങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയെ ലിക്വിഡ്-സോളിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, ലിക്വിഡ്-ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, ബോണ്ടഡ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി എന്നിങ്ങനെ തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.സിലിക്ക ജെൽ ഫില്ലർ ആയുള്ള ലിക്വിഡ്-സോളിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫിയും മൈക്രോസിലിക്ക മാട്രിക്സുള്ള ബോണ്ടഡ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുമാണ് ഏറ്റവും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നത്.

നിശ്ചല ഘട്ടത്തിന്റെ രൂപമനുസരിച്ച്, ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫിയെ കോളം ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, പേപ്പർ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, നേർത്ത പാളി ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി എന്നിങ്ങനെ വിഭജിക്കാം.അഡ്‌സോർപ്‌ഷൻ കപ്പാസിറ്റി അനുസരിച്ച്, അതിനെ അഡ്‌സോർപ്‌ഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, പാർട്ടീഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, അയോൺ എക്‌സ്‌ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി, ജെൽ പെർമിയേഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി എന്നിങ്ങനെ തിരിക്കാം.

സമീപ വർഷങ്ങളിൽ, വേർതിരിക്കൽ പ്രഭാവം മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനായി, ഉയർന്ന മർദ്ദത്തിൽ മൊബൈൽ ഫേസ് അതിവേഗം ഒഴുകാൻ ലിക്വിഡ് കോളം ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി സിസ്റ്റത്തിലേക്ക് ഉയർന്ന മർദ്ദത്തിലുള്ള ലിക്വിഡ് ഫ്ലോ സിസ്റ്റം ചേർത്തിട്ടുണ്ട്, അതിനാൽ ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമത (ഉയർന്ന മർദ്ദം എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു) ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി ഉദയം ചെയ്തിരിക്കുന്നു.

ഭാഗം
01 ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് അനാലിസിസ് തത്വം

ഗുണപരമായ അടിസ്ഥാനത്തിൽ കണക്കാക്കാൻ, ശുദ്ധമായ പദാർത്ഥങ്ങൾ മാനദണ്ഡങ്ങളായി ആവശ്യമാണ്;

ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷൻ താരതമ്യേന അളവിലുള്ള ഒരു രീതിയാണ്: അതായത്, മിശ്രിതത്തിലെ വിശകലനത്തിന്റെ അളവ് ശുദ്ധമായ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളിന്റെ അറിയപ്പെടുന്ന അളവിൽ നിന്ന് കണക്കാക്കുന്നു.

ഭാഗം
02 ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള അടിസ്ഥാനം

അളന്ന ഘടകത്തിന്റെ (W) അളവ് പ്രതികരണ മൂല്യത്തിന് (A) (പീക്ക് ഉയരം അല്ലെങ്കിൽ പീക്ക് ഏരിയ), W=f×A ആനുപാതികമാണ്.

ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് കറക്ഷൻ ഫാക്ടർ (എഫ്): ഇത് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് കണക്കുകൂട്ടൽ ഫോർമുലയുടെ ആനുപാതികമായ സ്ഥിരാങ്കമാണ്, അതിന്റെ ഭൗതിക അർത്ഥം യൂണിറ്റ് പ്രതികരണ മൂല്യം (പീക്ക് ഏരിയ) പ്രതിനിധീകരിക്കുന്ന അളന്ന ഘടകത്തിന്റെ അളവാണ്.

സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളിന്റെ അറിയപ്പെടുന്ന തുകയിൽ നിന്നും അതിന്റെ പ്രതികരണ മൂല്യത്തിൽ നിന്നും അളവ് തിരുത്തൽ ഘടകം ലഭിക്കും.

അജ്ഞാത ഘടകത്തിന്റെ പ്രതികരണ മൂല്യം അളക്കുക, ഘടകത്തിന്റെ അളവ് അളവ് തിരുത്തൽ ഘടകം വഴി ലഭിക്കും.

ഭാഗം
03 അളവ് വിശകലനത്തിലെ പൊതുവായ പദങ്ങൾ

സാമ്പിൾ (സാമ്പിൾ): ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് വിശകലനത്തിനായി ഒരു വിശകലനം അടങ്ങിയ ഒരു പരിഹാരം.സ്റ്റാൻഡേർഡ്, അജ്ഞാത സാമ്പിളുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.

സ്റ്റാൻഡേർഡ്: അറിയപ്പെടുന്ന ഏകാഗ്രതയുള്ള ഒരു ശുദ്ധമായ ഉൽപ്പന്നം.അജ്ഞാത സാമ്പിൾ (അറിയില്ല): പരിശോധിക്കേണ്ട മിശ്രിതം.

സാമ്പിൾ ഭാരം: പരിശോധിക്കേണ്ട സാമ്പിളിന്റെ യഥാർത്ഥ തൂക്കം.

നേർപ്പിക്കൽ: അജ്ഞാത സാമ്പിളിന്റെ നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം.

ഘടകം : അളവ് വിശകലനം ചെയ്യേണ്ട ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പീക്ക്, അതായത്, ഉള്ളടക്കം അജ്ഞാതമായ വിശകലനം.

ഘടകത്തിന്റെ അളവ് (തുക): പരിശോധിക്കേണ്ട പദാർത്ഥത്തിന്റെ ഉള്ളടക്കം (അല്ലെങ്കിൽ ഏകാഗ്രത).

സമഗ്രത : ഒരു കമ്പ്യൂട്ടർ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടിയുടെ പീക്ക് ഏരിയ അളക്കുന്നതിനുള്ള കമ്പ്യൂട്ടേഷണൽ പ്രക്രിയ.

കാലിബ്രേഷൻ കർവ്: ഘടക ഉള്ളടക്കത്തിന്റെ ഒരു രേഖീയ വക്രവും പ്രതികരണ മൂല്യവും, അനലിറ്റിന്റെ അജ്ഞാതമായ ഉള്ളടക്കം നിർണ്ണയിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന സ്റ്റാൻഡേർഡ് പദാർത്ഥത്തിന്റെ അറിയപ്പെടുന്ന അളവിൽ നിന്ന് സ്ഥാപിച്ചതാണ്.

ഭാഗം
04 ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് അനാലിസിസ്

1. അളവ് വിശകലനത്തിന് അനുയോജ്യമായ ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് രീതി തിരഞ്ഞെടുക്കുക:

l കണ്ടെത്തിയ ഘടകത്തിന്റെ പീക്ക് സ്ഥിരീകരിക്കുകയും 1.5-ൽ കൂടുതൽ റെസലൂഷൻ (R) നേടുകയും ചെയ്യുക

l പരീക്ഷിച്ച ഘടകങ്ങളുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടികളുടെ സ്ഥിരത (ശുദ്ധി) നിർണ്ണയിക്കുക

l രീതിയുടെ കണ്ടെത്തൽ പരിധിയും അളവ് പരിധിയും നിർണ്ണയിക്കുക;സംവേദനക്ഷമതയും രേഖീയ ശ്രേണിയും

2. വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകളുടെ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു കാലിബ്രേഷൻ കർവ് സ്ഥാപിക്കുക

3. അളവ് രീതികളുടെ കൃത്യതയും കൃത്യതയും പരിശോധിക്കുക

4. സാമ്പിൾ ശേഖരണം, ഡാറ്റാ പ്രോസസ്സിംഗ്, ഫലങ്ങൾ റിപ്പോർട്ടുചെയ്യൽ എന്നിവ നടപ്പിലാക്കുന്നതിന് അനുബന്ധ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി മാനേജ്മെന്റ് സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിക്കുക

ഭാഗം
05 ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പീക്കുകളുടെ ഐഡന്റിഫിക്കേഷൻ (ഗുണാത്മകം)

കണക്കാക്കേണ്ട ഓരോ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടിയും ഗുണപരമായി തിരിച്ചറിയുക

ആദ്യം, കണക്കാക്കേണ്ട ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പീക്കിന്റെ നിലനിർത്തൽ സമയം (Rt) നിർണ്ണയിക്കാൻ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിൾ ഉപയോഗിക്കുക.നിലനിർത്തൽ സമയം താരതമ്യം ചെയ്യുന്നതിലൂടെ, അജ്ഞാത സാമ്പിളിലെ ഓരോ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടിയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഘടകം കണ്ടെത്തുക.സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളുമായി നിലനിർത്തൽ സമയം താരതമ്യം ചെയ്യുന്നതാണ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് ഗുണപരമായ രീതി.മാനദണ്ഡം അപര്യാപ്തമാണ്കൂടുതൽ സ്ഥിരീകരണം (ഗുണപരമായ)

1. സ്റ്റാൻഡേർഡ് കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ രീതി

2. ഒരേ സമയം മറ്റ് രീതികൾ ഉപയോഗിക്കുക: മറ്റ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് രീതികൾ (സംവിധാനം മാറ്റുക, ഉദാഹരണത്തിന്: വ്യത്യസ്ത ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച്), മറ്റ് ഡിറ്റക്ടറുകൾ (PDA: സ്പെക്ട്രം താരതമ്യം, സ്പെക്ട്രം ലൈബ്രറി തിരയൽ; MS: മാസ് സ്പെക്ട്രം വിശകലനം, സ്പെക്ട്രം ലൈബ്രറി തിരയൽ)

3. മറ്റ് ഉപകരണങ്ങളും രീതികളും

ഭാഗം
06 ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പീക്ക് സ്ഥിരതയുടെ സ്ഥിരീകരണം

ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പീക്ക് സ്ഥിരത (ശുദ്ധി) സ്ഥിരീകരിക്കുക

ഓരോ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കൊടുമുടിയിലും ഒരു അളന്ന ഘടകം മാത്രമേ ഉള്ളൂവെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക

കോ-എല്യൂട്ടിംഗ് പദാർത്ഥങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള ഇടപെടലിനായി പരിശോധിക്കുക (മാലിന്യങ്ങൾ)

ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പീക്ക് സ്ഥിരത (ശുദ്ധി) സ്ഥിരീകരിക്കുന്നതിനുള്ള രീതികൾ

ഫോട്ടോഡയോഡ് മാട്രിക്സ് (പിഡിഎ) ഡിറ്റക്ടറുകളുമായി സ്പെക്ട്രോഗ്രാമുകളെ താരതമ്യം ചെയ്യുന്നു

പീക്ക് പ്യൂരിറ്റി ഐഡന്റിഫിക്കേഷൻ

2996 പ്യൂരിറ്റി ആംഗിൾ തിയറി

ഭാഗം 07-ൽ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന അളവ് രീതികൾ

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് രീതി, ബാഹ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതി, ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതി എന്നിങ്ങനെ തിരിച്ചിരിക്കുന്നു:

1. ബാഹ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതി: ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയിലാണ് ഏറ്റവും കൂടുതൽ ഉപയോഗിക്കുന്നത്

സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളുകളായി പരിശോധിക്കേണ്ട സംയുക്തങ്ങളുടെ ശുദ്ധമായ സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിച്ച് അറിയപ്പെടുന്ന സാന്ദ്രതയുടെ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളുകളുടെ ഒരു ശ്രേണി തയ്യാറാക്കി.നിരയിലേക്ക് അതിന്റെ പ്രതികരണ മൂല്യം (പീക്ക് ഏരിയ) വരെ കുത്തിവച്ചു.
ഒരു നിശ്ചിത പരിധിക്കുള്ളിൽ, സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളിന്റെ സാന്ദ്രതയും പ്രതികരണ മൂല്യവും തമ്മിൽ ഒരു നല്ല രേഖീയ ബന്ധമുണ്ട്, അതായത് W= f×A , കൂടാതെ ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് നിർമ്മിക്കുന്നു.

കൃത്യമായ അതേ പരീക്ഷണാടിസ്ഥാനത്തിൽ, അളക്കേണ്ട ഘടകത്തിന്റെ പ്രതികരണ മൂല്യം ലഭിക്കുന്നതിന് അജ്ഞാത സാമ്പിൾ കുത്തിവയ്ക്കുക.അറിയപ്പെടുന്ന ഗുണകം f അനുസരിച്ച്, അളക്കേണ്ട ഘടകത്തിന്റെ സാന്ദ്രത ലഭിക്കും.

ബാഹ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതിയുടെ ഗുണങ്ങൾ:ലളിതമായ പ്രവർത്തനവും കണക്കുകൂട്ടലും, ഇത് സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന അളവ് രീതിയാണ്;ഓരോ ഘടകങ്ങളും കണ്ടെത്തി ഒഴിവാക്കേണ്ട ആവശ്യമില്ല;സാധാരണ സാമ്പിൾ ആവശ്യമാണ്;സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിളിന്റെയും അജ്ഞാത സാമ്പിളിന്റെയും അളവെടുപ്പ് വ്യവസ്ഥകൾ സ്ഥിരതയുള്ളതായിരിക്കണം;കുത്തിവയ്പ്പ് അളവ് കൃത്യമായിരിക്കണം.

ബാഹ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതിയുടെ പോരായ്മകൾ:ഡിറ്റക്ടറിന്റെ സെൻസിറ്റിവിറ്റി, ഫ്ലോ റേറ്റ്, മൊബൈൽ ഫേസിന്റെ ഘടന എന്നിവ മാറ്റാൻ കഴിയില്ല എന്നിങ്ങനെയുള്ള പരീക്ഷണാത്മക വ്യവസ്ഥകൾ ഉയർന്നതായിരിക്കണം;ഓരോ കുത്തിവയ്പ്പിന്റെയും അളവ് നല്ല ആവർത്തനക്ഷമത ഉണ്ടായിരിക്കണം.

2. ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതി: കൃത്യവും എന്നാൽ പ്രശ്‌നകരവുമാണ്, ഏറ്റവും സാധാരണ രീതികളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്നു

ഇന്റേണൽ സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ അറിയപ്പെടുന്ന തുക ഒരു മിക്സഡ് സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഉണ്ടാക്കാൻ സ്റ്റാൻഡേർഡിലേക്ക് ചേർക്കുന്നു, കൂടാതെ അറിയപ്പെടുന്ന ഏകാഗ്രതയുടെ പ്രവർത്തന നിലവാരങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പര തയ്യാറാക്കപ്പെടുന്നു.മിക്സഡ് സ്റ്റാൻഡേർഡിൽ സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ മോളാർ അനുപാതവും ആന്തരിക നിലവാരവും മാറ്റമില്ലാതെ തുടരുന്നു.ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളത്തിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കുക, പ്രതികരണ മൂല്യമായി (സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിൾ പീക്ക് ഏരിയ / ഇന്റേണൽ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാമ്പിൾ പീക്ക് ഏരിയ) എടുക്കുക.പ്രതികരണ മൂല്യവും പ്രവർത്തന നിലവാരത്തിന്റെ ഏകാഗ്രതയും തമ്മിലുള്ള രേഖീയ ബന്ധം അനുസരിച്ച്, അതായത് W= f×A , ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് നിർമ്മിക്കുന്നു.

അജ്ഞാത സാമ്പിളിലേക്ക് ആന്തരിക നിലവാരത്തിന്റെ ഒരു അറിയപ്പെടുന്ന തുക ചേർക്കുകയും അളക്കേണ്ട ഘടകത്തിന്റെ പ്രതികരണ മൂല്യം ലഭിക്കുന്നതിന് കോളത്തിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.അറിയപ്പെടുന്ന ഗുണകം f അനുസരിച്ച്, അളക്കേണ്ട ഘടകത്തിന്റെ സാന്ദ്രത ലഭിക്കും.

ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതിയുടെ സവിശേഷതകൾ:ഓപ്പറേഷൻ സമയത്ത്, സാമ്പിളും ഇന്റേണൽ സ്റ്റാൻഡേർഡും ഒരുമിച്ച് കലർത്തി ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളത്തിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കുന്നു, അതിനാൽ മിക്സഡ് ലായനിയിലെ ആന്തരിക മാനദണ്ഡവുമായി അളന്ന ഘടകത്തിന്റെ അളവിന്റെ അനുപാതം സ്ഥിരമായിരിക്കുന്നിടത്തോളം, സാമ്പിൾ വോളിയത്തിന്റെ മാറ്റം അളവ് ഫലങ്ങളെ ബാധിക്കില്ല..ആന്തരിക സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതി സാമ്പിൾ വോളിയത്തിന്റെ സ്വാധീനം ഓഫ്‌സെറ്റ് ചെയ്യുന്നു , കൂടാതെ മൊബൈൽ ഘട്ടവും ഡിറ്റക്ടറും പോലും, അതിനാൽ ഇത് ബാഹ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതിയേക്കാൾ കൃത്യമാണ്.

ഭാഗം
08 ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് അനാലിസിസ് ഫലങ്ങളെ ബാധിക്കുന്ന ഘടകങ്ങൾ

മോശം കൃത്യത ഇതിന് കാരണമാകാം:

തെറ്റായ പീക്ക് ഏരിയ സംയോജനം, സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കൽ സമയത്ത് അവതരിപ്പിച്ച സാമ്പിൾ വിഘടിപ്പിക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ മാലിന്യങ്ങൾ, സാമ്പിൾ വിയൽ സീൽ ചെയ്തിട്ടില്ല, സാമ്പിൾ അല്ലെങ്കിൽ സോൾവെന്റ് വോലാറ്റിലൈസേഷൻ, തെറ്റായ സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കൽ, സാമ്പിൾ കുത്തിവയ്പ്പ് പ്രശ്നങ്ങൾ, തെറ്റായ ആന്തരിക നിലവാരം തയ്യാറാക്കൽ

മോശം കൃത്യതയ്ക്കുള്ള സാധ്യമായ കാരണങ്ങൾ:

തെറ്റായ പീക്ക് ഇന്റഗ്രേഷൻ, കുത്തിവയ്പ്പ് അല്ലെങ്കിൽ ഇൻജക്ടർ പ്രശ്നങ്ങൾ, സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കൽ സമയത്ത് അവതരിപ്പിച്ച സാമ്പിൾ ഡീകോപോസിഷൻ അല്ലെങ്കിൽ മാലിന്യങ്ങൾ, ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പ്രശ്നങ്ങൾ, ഡിഗ്രേഡഡ് ഡിറ്റക്ടർ പ്രതികരണം