ഒരു ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളം എങ്ങനെ തിരഞ്ഞെടുക്കാമെന്ന് ഈ ലേഖനം നിങ്ങളെ പഠിപ്പിക്കുന്നു

ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയാണ് അസംസ്‌കൃത വസ്തുക്കൾ, ഇൻ്റർമീഡിയറ്റുകൾ, തയ്യാറെടുപ്പുകൾ, പാക്കേജിംഗ് മെറ്റീരിയലുകൾ എന്നിവയിലെ ഓരോ ഘടകത്തിൻ്റെയും മാലിന്യങ്ങളും ഉള്ളടക്കവും പരിശോധിക്കുന്നതിനുള്ള പ്രധാന രീതി, എന്നാൽ പല പദാർത്ഥങ്ങൾക്കും ആശ്രയിക്കാൻ സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതികളില്ല, അതിനാൽ പുതിയ രീതികൾ വികസിപ്പിക്കേണ്ടത് അനിവാര്യമാണ്. ലിക്വിഡ് ഫേസ് രീതികളുടെ വികസനത്തിൽ, ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിയുടെ കാതൽ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളമാണ്, അതിനാൽ അനുയോജ്യമായ ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളം എങ്ങനെ തിരഞ്ഞെടുക്കാം എന്നത് നിർണായകമാണ്. ഈ ലേഖനത്തിൽ, മൂന്ന് വശങ്ങളിൽ നിന്ന് ഒരു ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളം എങ്ങനെ തിരഞ്ഞെടുക്കാമെന്ന് രചയിതാവ് വിശദീകരിക്കും: മൊത്തത്തിലുള്ള ആശയങ്ങൾ, പരിഗണനകൾ, ആപ്ലിക്കേഷൻ സ്കോപ്പ്.

എ. ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി നിരകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിനുള്ള മൊത്തത്തിലുള്ള ആശയങ്ങൾ

1. അനലിറ്റിൻ്റെ ഭൗതികവും രാസപരവുമായ ഗുണങ്ങൾ വിലയിരുത്തുക: രാസഘടന, ലയിക്കുന്നത, സ്ഥിരത (ഓക്‌സിഡൈസ്/കുറയ്ക്കൽ/ജലവിശ്ലേഷണം എന്നിവ എളുപ്പമാണോ എന്നതുപോലുള്ളവ), അസിഡിറ്റി, ക്ഷാരത്വം മുതലായവ, പ്രത്യേകിച്ച് രാസഘടനയാണ് പ്രധാനം. സംയോജിത ഗ്രൂപ്പിന് ശക്തമായ അൾട്രാവയലറ്റ് ആഗിരണവും ശക്തമായ ഫ്ലൂറസൻസും ഉള്ളത് പോലെയുള്ള ഗുണങ്ങൾ നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള ഘടകം;

2. വിശകലനത്തിൻ്റെ ഉദ്ദേശ്യം നിർണ്ണയിക്കുക: ഉയർന്ന വേർതിരിവ്, ഉയർന്ന നിര കാര്യക്ഷമത, ഹ്രസ്വ വിശകലന സമയം, ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമത, ഉയർന്ന മർദ്ദം പ്രതിരോധം, നീണ്ട നിരയുടെ ആയുസ്സ്, കുറഞ്ഞ ചെലവ് മുതലായവ ആവശ്യമാണോ;

1. അനുയോജ്യമായ ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളം തിരഞ്ഞെടുക്കുക: ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് ഫില്ലറിൻ്റെ ഘടന, കണികാ വലിപ്പം, സുഷിരങ്ങളുടെ വലുപ്പം, താപനില സഹിഷ്ണുത, pH ടോളറൻസ്, അനലിറ്റിൻ്റെ അഡ്‌സോർപ്ഷൻ മുതലായവ പോലെയുള്ള ഭൗതിക, രാസ ഗുണങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കുക.

1. ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി നിരകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിനുള്ള പരിഗണനകൾ

ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളത്തിൻ്റെ തന്നെ ഭൗതികവും രാസപരവുമായ ഗുണങ്ങളുടെ വീക്ഷണകോണിൽ നിന്ന് ഒരു ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളം തിരഞ്ഞെടുക്കുമ്പോൾ പരിഗണിക്കേണ്ട ഘടകങ്ങളെ ഈ അധ്യായം ചർച്ച ചെയ്യും. 2.1 ഫില്ലർ മാട്രിക്സ്

2.1.1 സിലിക്ക ജെൽ മാട്രിക്സ് മിക്ക ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളങ്ങളുടെയും ഫില്ലർ മാട്രിക്സ് സിലിക്ക ജെൽ ആണ്. ഇത്തരത്തിലുള്ള ഫില്ലറിന് ഉയർന്ന പരിശുദ്ധി, കുറഞ്ഞ വില, ഉയർന്ന മെക്കാനിക്കൽ ശക്തി എന്നിവയുണ്ട്, കൂടാതെ ഗ്രൂപ്പുകളെ പരിഷ്‌ക്കരിക്കാൻ എളുപ്പമാണ് (ഫീനൈൽ ബോണ്ടിംഗ്, അമിനോ ബോണ്ടിംഗ്, സയാനോ ബോണ്ടിംഗ് മുതലായവ), എന്നാൽ ഇത് സഹിക്കുന്ന pH മൂല്യവും താപനില പരിധിയും പരിമിതമാണ്: മിക്ക സിലിക്ക ജെൽ മാട്രിക്സ് ഫില്ലറുകളുടെയും pH ശ്രേണി 2 മുതൽ 8 വരെയാണ്, എന്നാൽ പ്രത്യേകമായി പരിഷ്‌ക്കരിച്ച സിലിക്ക ജെൽ ബോണ്ടഡ് ഫേസുകളുടെ pH ശ്രേണി 1.5 മുതൽ 10 വരെ വിശാലമായിരിക്കും, കൂടാതെ പ്രത്യേകമായി പരിഷ്‌ക്കരിച്ച സിലിക്ക ജെൽ ബോണ്ടഡ് ഘട്ടങ്ങളും കുറഞ്ഞ pH-ൽ സ്ഥിരതയുള്ളതാണ്. അജിലൻ്റ് ZORBAX RRHD stablebond-C18 പോലുള്ളവ, pH 1 മുതൽ 8 വരെ സ്ഥിരതയുള്ളതാണ്; സിലിക്ക ജെൽ മാട്രിക്സിൻ്റെ ഉയർന്ന താപനില പരിധി സാധാരണയായി 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസാണ്, കൂടാതെ ചില ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി നിരകൾക്ക് ഉയർന്ന pH-ൽ 40 ℃ താപനില സഹിക്കാൻ കഴിയും.

2.1.2 പോളിമർ മാട്രിക്സ് പോളിമർ ഫില്ലറുകൾ കൂടുതലും പോളിസ്റ്റൈറൈൻ-ഡിവിനൈൽബെൻസീൻ അല്ലെങ്കിൽ പോളിമെത്തക്രൈലേറ്റ് ആണ്. വിശാലമായ pH ശ്രേണിയെ സഹിക്കാൻ കഴിയും എന്നതാണ് അവരുടെ ഗുണങ്ങൾ - അവ 1 മുതൽ 14 വരെ പരിധിയിൽ ഉപയോഗിക്കാം, ഉയർന്ന താപനിലയിൽ അവ കൂടുതൽ പ്രതിരോധിക്കും (80 ° C ന് മുകളിൽ എത്താം). സിലിക്ക അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള C18 ഫില്ലറുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഇത്തരത്തിലുള്ള ഫില്ലറിന് ശക്തമായ ഹൈഡ്രോഫോബിസിറ്റി ഉണ്ട്, കൂടാതെ പ്രോട്ടീനുകൾ പോലുള്ള സാമ്പിളുകൾ വേർതിരിക്കുന്നതിന് മാക്രോപോറസ് പോളിമർ വളരെ ഫലപ്രദമാണ്. സിലിക്ക അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഫില്ലറുകളേക്കാൾ നിരയുടെ കാര്യക്ഷമത കുറവും മെക്കാനിക്കൽ ശക്തി ദുർബലവുമാണ് എന്നതാണ് ഇതിൻ്റെ ദോഷങ്ങൾ. 2.2 കണികാ രൂപം

മിക്ക ആധുനിക HPLC ഫില്ലറുകളും ഗോളാകൃതിയിലുള്ള കണങ്ങളാണ്, എന്നാൽ ചിലപ്പോൾ അവ ക്രമരഹിതമായ കണങ്ങളാണ്. ഗോളാകൃതിയിലുള്ള കണങ്ങൾക്ക് താഴ്ന്ന നിര മർദ്ദം, ഉയർന്ന നിരയുടെ കാര്യക്ഷമത, സ്ഥിരത, ദീർഘായുസ്സ് എന്നിവ നൽകാൻ കഴിയും; ഉയർന്ന വിസ്കോസിറ്റിയുള്ള മൊബൈൽ ഫേസുകൾ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ (ഫോസ്ഫോറിക് ആസിഡ് പോലുള്ളവ) അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ ലായനി വിസ്കോസ് ആയിരിക്കുമ്പോൾ, ക്രമരഹിതമായ കണികകൾക്ക് ഒരു വലിയ നിർദ്ദിഷ്ട ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണമുണ്ട്, ഇത് രണ്ട് ഘട്ടങ്ങളുടെയും പൂർണ്ണമായ പ്രവർത്തനത്തിന് കൂടുതൽ അനുകൂലമാണ്, വില താരതമ്യേന കുറവാണ്. 2.3 കണികാ വലിപ്പം

ചെറിയ കണിക വലിപ്പം, കോളം കാര്യക്ഷമതയും ഉയർന്ന വിഭജനം, എന്നാൽ മോശമായ ഉയർന്ന സമ്മർദ്ദം പ്രതിരോധം. ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന കോളം 5 μm കണികാ വലിപ്പമുള്ള നിരയാണ്; വേർതിരിക്കൽ ആവശ്യകത ഉയർന്നതാണെങ്കിൽ, ഒരു 1.5-3 μm ഫില്ലർ തിരഞ്ഞെടുക്കാം, ഇത് ചില സങ്കീർണ്ണമായ മാട്രിക്സ്, മൾട്ടി-ഘടക സാമ്പിളുകളുടെ വേർതിരിക്കൽ പ്രശ്നം പരിഹരിക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യമാണ്. യുപിഎൽസിക്ക് 1.5 മൈക്രോൺ ഫില്ലറുകൾ ഉപയോഗിക്കാം; സെമി-പ്രിപ്പറേറ്റീവ് അല്ലെങ്കിൽ പ്രിപ്പറേറ്റീവ് നിരകൾക്കായി 10 μm അല്ലെങ്കിൽ വലിയ കണികാ വലിപ്പമുള്ള ഫില്ലറുകൾ പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കുന്നു. 2.4 കാർബൺ ഉള്ളടക്കം

കാർബൺ ഉള്ളടക്കം സിലിക്ക ജെല്ലിൻ്റെ ഉപരിതലത്തിലെ ബോണ്ടഡ് ഘട്ടത്തിൻ്റെ അനുപാതത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് നിർദ്ദിഷ്ട ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണവും ബോണ്ടഡ് ഫേസ് കവറേജുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഉയർന്ന കാർബൺ ഉള്ളടക്കം ഉയർന്ന കോളം കപ്പാസിറ്റിയും ഉയർന്ന റെസല്യൂഷനും നൽകുന്നു, ഉയർന്ന വേർതിരിവ് ആവശ്യമുള്ള സങ്കീർണ്ണ സാമ്പിളുകൾക്കായി ഇത് പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കുന്നു, എന്നാൽ രണ്ട് ഘട്ടങ്ങൾ തമ്മിലുള്ള നീണ്ട ഇടപെടൽ സമയം കാരണം, വിശകലന സമയം ദൈർഘ്യമേറിയതാണ്; കുറഞ്ഞ കാർബൺ ഉള്ളടക്കമുള്ള ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് നിരകൾക്ക് ചെറിയ വിശകലന സമയമുണ്ട്, കൂടാതെ വ്യത്യസ്ത സെലക്റ്റിവിറ്റികൾ കാണിക്കാനും കഴിയും, കൂടാതെ ദ്രുത വിശകലനം ആവശ്യമുള്ള ലളിതമായ സാമ്പിളുകൾക്കും ഉയർന്ന ജലീയ ഘട്ട സാഹചര്യങ്ങൾ ആവശ്യമുള്ള സാമ്പിളുകൾക്കുമായി പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കുന്നു. സാധാരണയായി, C18 ൻ്റെ കാർബൺ ഉള്ളടക്കം 7% മുതൽ 19% വരെയാണ്. 2.5 സുഷിരത്തിൻ്റെ വലിപ്പവും പ്രത്യേക ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണവും

HPLC അഡോർപ്ഷൻ മീഡിയ സുഷിരങ്ങളുള്ള കണങ്ങളാണ്, കൂടാതെ മിക്ക ഇടപെടലുകളും സുഷിരങ്ങളിലാണ് നടക്കുന്നത്. അതിനാൽ, തന്മാത്രകൾ ആഗിരണം ചെയ്യാനും വേർപെടുത്താനും സുഷിരങ്ങളിൽ പ്രവേശിക്കണം.

സുഷിരത്തിൻ്റെ വലിപ്പവും പ്രത്യേക ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണവും രണ്ട് പരസ്പര പൂരക ആശയങ്ങളാണ്. ചെറിയ സുഷിരങ്ങളുടെ വലിപ്പം എന്നാൽ വലിയ നിർദ്ദിഷ്ട ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം എന്നാണ് അർത്ഥമാക്കുന്നത്, തിരിച്ചും. ഒരു വലിയ നിർദ്ദിഷ്ട ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണം സാമ്പിൾ തന്മാത്രകളും ബന്ധിത ഘട്ടങ്ങളും തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനം വർദ്ധിപ്പിക്കും, നിലനിർത്തൽ വർദ്ധിപ്പിക്കും, സാമ്പിൾ ലോഡിംഗും കോളം ശേഷിയും വർദ്ധിപ്പിക്കും, സങ്കീർണ്ണമായ ഘടകങ്ങളെ വേർതിരിക്കുന്നു. പൂർണ്ണമായും പോറസ് ഫില്ലറുകൾ ഇത്തരത്തിലുള്ള ഫില്ലറുകളിൽ പെടുന്നു. ഉയർന്ന വേർതിരിക്കൽ ആവശ്യകതകളുള്ളവർക്ക്, വലിയ പ്രത്യേക ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണമുള്ള ഫില്ലറുകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു; ചെറിയ നിർദ്ദിഷ്ട ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണത്തിന് പിന്നിലെ മർദ്ദം കുറയ്ക്കാനും കോളത്തിൻ്റെ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്താനും ഗ്രേഡിയൻ്റ് വിശകലനത്തിന് അനുയോജ്യമായ സന്തുലിത സമയം കുറയ്ക്കാനും കഴിയും. കോർ-ഷെൽ ഫില്ലറുകൾ ഇത്തരത്തിലുള്ള ഫില്ലറുകളിൽ പെടുന്നു. വേർതിരിവ് ഉറപ്പാക്കുന്നതിൻ്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ, ഉയർന്ന വിശകലന കാര്യക്ഷമത ആവശ്യകതകളുള്ളവർക്കായി ചെറിയ നിർദ്ദിഷ്ട ഉപരിതല വിസ്തീർണ്ണമുള്ള ഫില്ലറുകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. 2.6 പോർ വോളിയവും മെക്കാനിക്കൽ ശക്തിയും

പോർ വോളിയം, "പോർ വോളിയം" എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു, ഒരു യൂണിറ്റ് കണികയിലെ ശൂന്യമായ വോളിയത്തിൻ്റെ വലുപ്പത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഇത് ഫില്ലറിൻ്റെ മെക്കാനിക്കൽ ശക്തിയെ നന്നായി പ്രതിഫലിപ്പിക്കും. വലിയ പോർ വോളിയമുള്ള ഫില്ലറുകളുടെ മെക്കാനിക്കൽ ശക്തി ചെറിയ സുഷിരങ്ങൾ ഉള്ള ഫില്ലറുകളേക്കാൾ അല്പം ദുർബലമാണ്. സുഷിരങ്ങളുടെ അളവ് 1.5 mL/g-ൽ കുറവോ തുല്യമോ ഉള്ള ഫില്ലറുകൾ കൂടുതലും HPLC വേർതിരിക്കലിനായി ഉപയോഗിക്കുന്നു, അതേസമയം 1.5 mL/g-ൽ കൂടുതൽ പോർ വോളിയമുള്ള ഫില്ലറുകൾ പ്രധാനമായും മോളിക്യുലർ എക്‌സ്‌ക്ലൂഷൻ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫിക്കും ലോ-പ്രഷർ ക്രോമാറ്റോഗ്രഫിക്കും ഉപയോഗിക്കുന്നു. 2.7 ക്യാപ്പിംഗ് നിരക്ക്

സംയുക്തങ്ങളും സിലനോൾ ഗ്രൂപ്പുകളും (ആൽക്കലൈൻ സംയുക്തങ്ങളും സിലനോൾ ഗ്രൂപ്പുകളും തമ്മിലുള്ള അയോണിക് ബോണ്ടിംഗ്, വാൻ ഡെർ വാൽസ് ഫോഴ്‌സ്, അസിഡിക് സംയുക്തങ്ങളും സിലനോൾ ഗ്രൂപ്പുകളും തമ്മിലുള്ള ഹൈഡ്രജൻ ബോണ്ടുകൾ തുടങ്ങിയവ) തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനം മൂലമുണ്ടാകുന്ന ടെയ്‌ലിംഗ് കൊടുമുടികൾ ക്യാപ്പിംഗിന് കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും, അതുവഴി നിരയുടെ കാര്യക്ഷമതയും പീക്ക് ആകൃതിയും മെച്ചപ്പെടുത്താൻ കഴിയും. . അൺക്യാപ്ഡ് ബോണ്ടഡ് ഫേസുകൾ ക്യാപ്ഡ് ബോണ്ടഡ് ഫേസുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ വ്യത്യസ്ത സെലക്റ്റിവിറ്റികൾ ഉണ്ടാക്കും, പ്രത്യേകിച്ച് ധ്രുവ സാമ്പിളുകൾക്ക്.

1. വ്യത്യസ്‌ത ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി നിരകളുടെ അപേക്ഷാ വ്യാപ്തി

ഈ അധ്യായം ചില സന്ദർഭങ്ങളിലൂടെ വിവിധ തരത്തിലുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി നിരകളുടെ പ്രയോഗ വ്യാപ്തി വിവരിക്കും.

3.1 വിപരീത ഘട്ടം C18 ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളം

C18 കോളം ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന റിവേഴ്‌സ്ഡ്-ഫേസ് കോളമാണ്, ഇത് മിക്ക ഓർഗാനിക് പദാർത്ഥങ്ങളുടെയും ഉള്ളടക്കവും അശുദ്ധി പരിശോധനകളും നിറവേറ്റാൻ കഴിയും, ഇത് ഇടത്തരം-ധ്രുവ, ദുർബലമായ ധ്രുവീയ, നോൺ-പോളാർ പദാർത്ഥങ്ങൾക്ക് ബാധകമാണ്. നിർദ്ദിഷ്ട വേർതിരിക്കൽ ആവശ്യകതകൾ അനുസരിച്ച് C18 ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളത്തിൻ്റെ തരവും സ്പെസിഫിക്കേഷനും തിരഞ്ഞെടുക്കണം. ഉദാഹരണത്തിന്, ഉയർന്ന വേർതിരിക്കൽ ആവശ്യകതകളുള്ള പദാർത്ഥങ്ങൾക്ക്, 5 μm*4.6 mm*250 mm സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട്; സങ്കീർണ്ണമായ വേർതിരിക്കൽ മെട്രിക്സും സമാനമായ ധ്രുവത്വവുമുള്ള പദാർത്ഥങ്ങൾക്ക്, 4 μm*4.6 mm*250 mm സ്പെസിഫിക്കേഷനുകളോ ചെറിയ കണികാ വലുപ്പങ്ങളോ ഉപയോഗിക്കാം. ഉദാഹരണത്തിന്, സെലെകോക്സിബ് എപിഐയിലെ രണ്ട് ജനിതക വിഷ മാലിന്യങ്ങൾ കണ്ടെത്തുന്നതിന് രചയിതാവ് 3 μm*4.6 മിമി*250 മിമി കോളം ഉപയോഗിച്ചു. രണ്ട് പദാർത്ഥങ്ങളുടെ വേർതിരിവ് 2.9 ൽ എത്താം, അത് മികച്ചതാണ്. കൂടാതെ, വേർപിരിയൽ ഉറപ്പാക്കുന്നതിനുള്ള മുൻകരുതലിനു കീഴിൽ, ദ്രുത വിശകലനം ആവശ്യമെങ്കിൽ, 10 മില്ലീമീറ്ററോ 15 മില്ലീമീറ്ററോ ഉള്ള ഒരു ചെറിയ കോളം പലപ്പോഴും തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെടുന്നു. ഉദാഹരണത്തിന്, പൈപ്പ്രാക്വിൻ ഫോസ്ഫേറ്റ് API-യിലെ ഒരു ജനിതക മാലിന്യം കണ്ടെത്തുന്നതിന് രചയിതാവ് LC-MS/MS ഉപയോഗിച്ചപ്പോൾ, 3 μm*2.1 mm*100 mm കോളം ഉപയോഗിച്ചു. അശുദ്ധിയും പ്രധാന ഘടകവും തമ്മിലുള്ള വേർതിരിവ് 2.0 ആയിരുന്നു, ഒരു സാമ്പിൾ കണ്ടെത്തൽ 5 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ പൂർത്തിയാക്കാൻ കഴിയും. 3.2 റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് ഫിനൈൽ കോളം

ഫിനൈൽ കോളം റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് കോളത്തിൻ്റെ ഒരു തരം കൂടിയാണ്. ഈ തരം നിരയ്ക്ക് ആരോമാറ്റിക് സംയുക്തങ്ങൾക്ക് ശക്തമായ സെലക്റ്റിവിറ്റി ഉണ്ട്. സാധാരണ C18 കോളം ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുന്ന ആരോമാറ്റിക് സംയുക്തങ്ങളുടെ പ്രതികരണം ദുർബലമാണെങ്കിൽ, നിങ്ങൾക്ക് ഫിനൈൽ കോളം മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നത് പരിഗണിക്കാം. ഉദാഹരണത്തിന്, ഞാൻ celecoxib API നിർമ്മിക്കുമ്പോൾ, അതേ നിർമ്മാതാവിൻ്റെ phenyl നിരയും അതേ സ്പെസിഫിക്കേഷനും (എല്ലാം 5 μm*4.6 mm*250 mm) അളന്ന പ്രധാന ഘടക പ്രതികരണം C18 നിരയുടെ 7 മടങ്ങായിരുന്നു. 3.3 സാധാരണ-ഘട്ട നിര

റിവേഴ്‌സ്ഡ്-ഫേസ് കോളത്തിൻ്റെ ഫലപ്രദമായ സപ്ലിമെൻ്റ് എന്ന നിലയിൽ, ഉയർന്ന ധ്രുവീയ സംയുക്തങ്ങൾക്ക് സാധാരണ-ഘട്ട നിര അനുയോജ്യമാണ്. റിവേഴ്‌സ്ഡ്-ഫേസ് കോളത്തിൽ 90%-ൽ കൂടുതൽ ജലീയ ഫേസ് ഉപയോഗിച്ച് എല്യൂട്ടുചെയ്യുമ്പോൾ പീക്ക് ഇപ്പോഴും വളരെ വേഗതയുള്ളതാണെങ്കിൽ, കൂടാതെ സോൾവെൻ്റ് പീക്കിനോട് അടുത്ത് ഓവർലാപ്പ് ചെയ്യുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, നിങ്ങൾക്ക് സാധാരണ-ഘട്ട നിര മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നത് പരിഗണിക്കാം. ഇത്തരത്തിലുള്ള നിരയിൽ ഹിലിക് കോളം, അമിനോ കോളം, സയാനോ കോളം മുതലായവ ഉൾപ്പെടുന്നു.

3.3.1 ഹിലിക് കോളം ധ്രുവീയ പദാർത്ഥങ്ങളോടുള്ള പ്രതികരണം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനായി ഹൈലിക് കോളം സാധാരണയായി ഹൈഡ്രോഫിലിക് ഗ്രൂപ്പുകളെ ബോണ്ടഡ് ആൽക്കൈൽ ശൃംഖലയിൽ ഉൾപ്പെടുത്തുന്നു. പഞ്ചസാര പദാർത്ഥങ്ങളുടെ വിശകലനത്തിന് ഇത്തരത്തിലുള്ള നിര അനുയോജ്യമാണ്. സൈലോസിൻ്റെയും അതിൻ്റെ ഡെറിവേറ്റീവുകളുടെയും ഉള്ളടക്കവും അനുബന്ധ പദാർത്ഥങ്ങളും ചെയ്യുമ്പോൾ രചയിതാവ് ഇത്തരത്തിലുള്ള കോളം ഉപയോഗിച്ചു. സൈലോസ് ഡെറിവേറ്റീവിൻ്റെ ഐസോമറുകളും നന്നായി വേർതിരിക്കാനാകും;

3.3.2 അമിനോ നിരയും സയാനോ കോളവും അമിനോ കോളവും സയാനോ കോളവും പ്രത്യേക പദാർത്ഥങ്ങളുടെ തിരഞ്ഞെടുക്കൽ മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിന് യഥാക്രമം ബോണ്ടഡ് ആൽക്കൈൽ ശൃംഖലയുടെ അവസാനത്തിൽ അമിനോ, സയാനോ പരിഷ്കാരങ്ങൾ അവതരിപ്പിക്കുന്നതിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു: ഉദാഹരണത്തിന്, അമിനോ കോളം ഒരു നല്ല തിരഞ്ഞെടുപ്പാണ്. പഞ്ചസാര, അമിനോ ആസിഡുകൾ, ബേസുകൾ, അമൈഡുകൾ എന്നിവ വേർതിരിക്കുന്നതിന്; സംയോജിത ബോണ്ടുകളുടെ സാന്നിധ്യം കാരണം ഹൈഡ്രജനേറ്റഡ്, അൺഹൈഡ്രജൻ ചെയ്യാത്ത ഘടനാപരമായ സമാന പദാർത്ഥങ്ങളെ വേർതിരിക്കുമ്പോൾ സയാനോ കോളത്തിന് മികച്ച സെലക്ടിവിറ്റി ഉണ്ട്. സാധാരണ ഫേസ് കോളത്തിനും റിവേഴ്സ് ഫേസ് കോളത്തിനും ഇടയിൽ അമിനോ കോളവും സയാനോ കോളവും പലപ്പോഴും മാറാം, എന്നാൽ ഇടയ്ക്കിടെ മാറുന്നത് ശുപാർശ ചെയ്യുന്നില്ല. 3.4 ചിറൽ കോളം

ചിറൽ കോളം, പേര് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് പോലെ, ചിറൽ സംയുക്തങ്ങളെ വേർതിരിക്കുന്നതിനും വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിനും അനുയോജ്യമാണ്, പ്രത്യേകിച്ച് ഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ മേഖലയിൽ. പരമ്പരാഗത റിവേഴ്സ് ഫേസ്, നോർമൽ ഫേസ് നിരകൾ എന്നിവയ്ക്ക് ഐസോമറുകളുടെ വേർതിരിവ് നേടാൻ കഴിയാത്തപ്പോൾ ഇത്തരത്തിലുള്ള നിര പരിഗണിക്കാവുന്നതാണ്. ഉദാഹരണത്തിന്, രചയിതാവ് 1,2-ഡിഫെനൈലെഥൈലെൻഡിയമൈനിൻ്റെ രണ്ട് ഐസോമറുകൾ വേർതിരിക്കുന്നതിന് 5 μm*4.6 mm*250 mm ചിറൽ കോളം ഉപയോഗിച്ചു: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine, (1R, 2R)-1, 2 -diphenylethylenediamine, രണ്ടും തമ്മിലുള്ള വേർപിരിയൽ ഏകദേശം 2.0 ൽ എത്തി. എന്നിരുന്നാലും, ചിറൽ നിരകൾ മറ്റ് തരം നിരകളേക്കാൾ വില കൂടുതലാണ്, സാധാരണയായി 1W+/പീസ്. അത്തരം നിരകളുടെ ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, യൂണിറ്റിന് മതിയായ ബജറ്റ് ഉണ്ടാക്കേണ്ടതുണ്ട്. 3.5 അയൺ എക്സ്ചേഞ്ച് കോളം

അയോണുകൾ, പ്രോട്ടീനുകൾ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ, ചില പഞ്ചസാര പദാർത്ഥങ്ങൾ തുടങ്ങിയ ചാർജ്ജ് ചെയ്ത അയോണുകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിനും വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിനും അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് നിരകൾ അനുയോജ്യമാണ്. ഫില്ലർ തരം അനുസരിച്ച്, അവയെ കാറ്റേഷൻ എക്സ്ചേഞ്ച് കോളങ്ങൾ, അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് കോളങ്ങൾ, ശക്തമായ കാറ്റേഷൻ എക്സ്ചേഞ്ച് കോളങ്ങൾ എന്നിങ്ങനെ തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.

കേഷൻ എക്സ്ചേഞ്ച് നിരകളിൽ കാൽസ്യം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതും ഹൈഡ്രജൻ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതുമായ നിരകൾ ഉൾപ്പെടുന്നു, അവ പ്രധാനമായും അമിനോ ആസിഡുകൾ പോലുള്ള കാറ്റാനിക് പദാർത്ഥങ്ങളുടെ വിശകലനത്തിന് അനുയോജ്യമാണ്. ഉദാഹരണത്തിന്, കാൽസ്യം ഗ്ലൂക്കോണേറ്റും കാൽസ്യം അസറ്റേറ്റും ഫ്ലഷിംഗ് ലായനിയിൽ വിശകലനം ചെയ്യുമ്പോൾ രചയിതാവ് കാൽസ്യം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള നിരകൾ ഉപയോഗിച്ചു. രണ്ട് പദാർത്ഥങ്ങൾക്കും λ=210nm-ൽ ശക്തമായ പ്രതികരണമുണ്ടായിരുന്നു, വേർതിരിക്കൽ ഡിഗ്രി 3.0-ൽ എത്തി; ഗ്ലൂക്കോസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പദാർത്ഥങ്ങളെ വിശകലനം ചെയ്യുമ്പോൾ രചയിതാവ് ഹൈഡ്രജൻ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള നിരകൾ ഉപയോഗിച്ചു. നിരവധി പ്രധാന അനുബന്ധ പദാർത്ഥങ്ങൾ - മാൾട്ടോസ്, മാൾട്ടോട്രിയോസ്, ഫ്രക്ടോസ് - ഡിഫറൻഷ്യൽ ഡിറ്റക്ടറുകൾക്ക് കീഴിൽ ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമത ഉണ്ടായിരുന്നു, കണ്ടെത്തൽ പരിധി 0.5 ppm-ൽ താഴെയും വേർതിരിക്കൽ ഡിഗ്രി 2.0-2.5-ഉം.

ഓർഗാനിക് അമ്ലങ്ങൾ, ഹാലൊജൻ അയോണുകൾ തുടങ്ങിയ അയോണിക് പദാർത്ഥങ്ങളുടെ വിശകലനത്തിന് അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് നിരകൾ പ്രധാനമായും അനുയോജ്യമാണ്; ശക്തമായ കാറ്റേഷൻ എക്സ്ചേഞ്ച് നിരകൾക്ക് ഉയർന്ന അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് കപ്പാസിറ്റിയും സെലക്റ്റിവിറ്റിയും ഉണ്ട്, അവ സങ്കീർണ്ണമായ സാമ്പിളുകൾ വേർതിരിക്കാനും വിശകലനം ചെയ്യാനും അനുയോജ്യമാണ്.

രചയിതാവിൻ്റെ സ്വന്തം അനുഭവവുമായി സംയോജിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന നിരവധി സാധാരണ ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളങ്ങളുടെ തരങ്ങളുടെയും ആപ്ലിക്കേഷൻ ശ്രേണികളുടെയും ഒരു ആമുഖം മാത്രമാണ് മുകളിൽ പറഞ്ഞത്. വലിയ-പോർ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളങ്ങൾ, സ്മോൾ-പോർ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളങ്ങൾ, അഫിനിറ്റി ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളങ്ങൾ, മൾട്ടിമോഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളങ്ങൾ, അൾട്രാ-ഹൈ പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളങ്ങൾ (UHPLC), സൂപ്പർ ക്രിറ്റിക്കൽ ഫ്ലൂയിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളങ്ങൾ (സൂപ്പർ ക്രിറ്റിക്കൽ ഫ്ലൂയിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി) പോലുള്ള മറ്റ് പ്രത്യേക തരം ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളങ്ങൾ യഥാർത്ഥ ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ ഉണ്ട്. എസ്എഫ്‌സി), മുതലായവ. വിവിധ മേഖലകളിൽ അവർ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു. സാമ്പിളിൻ്റെ ഘടനയും ഗുണങ്ങളും, വേർതിരിക്കൽ ആവശ്യകതകളും മറ്റ് ഉദ്ദേശ്യങ്ങളും അനുസരിച്ച് പ്രത്യേക തരം ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളം തിരഞ്ഞെടുക്കണം.